尊龙凯时的细胞培养条件如下:气相组成为95%的空气与5%的二氧化碳,培养温度保持在37℃。A-673细胞系是来源于人类的横纹肌肉瘤细胞,广泛应用于癌症研究、肿瘤生物学和药物筛选等领域。这一细胞系经过短串联重复序列(STR)分析进行身份验证,以确保其遗传特征的一致性和实验的可重复性,适合在体外研究横纹肌肉瘤的生物行为和分子机制。A-673细胞系源自一名15岁女性,能在软琼脂培养基上形成克隆,并能在免疫抑制小鼠中形成肿瘤,展现了四个以上的标志性染色体,以及一个额外的F染色体和两个异常的B染色体。
关于细胞传代,首次建议使用1:2的比例。细胞传代的具体步骤如下:
1. 在弃去培养液后,使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 向培养瓶中加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液,置于37℃的培养箱中消化1-2分钟,期间需在显微镜下观察细胞的消化情况。若细胞大部分呈现圆形并已经脱落,及时轻敲培养瓶,并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞,使其完全脱落后吸出,并将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM下离心5分钟,弃去上清,重新加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按照1:2的比例,将细胞悬液分瓶(两个T25瓶),并补加新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
对于悬浮细胞的传代,步骤如下:
1. 使用半换液法处理,竖直放置培养瓶在培养箱中静置约1小时,轻轻吸去3ml培养基,然后替换以3ml完全培养基。如果培养基变色缓慢,可以直接加入约500ul的FBS,传代时则可以直接补充5ml培养基,分到两个培养瓶中。通常经过3次这样的传代后,可以选择离心处理以去除死细胞。
2. 用离心换液法时,收集细胞悬液至离心管中,1000RPM离心5分钟,弃去上清,再加入1-2ml培养基重悬,随后按1:2的比例分装至新的T25瓶,并添加6-8ml新配置的完全培养基,以保持细胞的生长活力。
对于细胞的冻存,步骤如下:
1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时,弃去培养液,并用PBS洗涤一次;
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液,观察细胞在显微镜下的状态,待细胞缩回并呈现圆形时,加入5ml完全培养基以终止消化,轻轻吹打使其脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟;
3. 弃去上清,沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),充分混匀并加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中,若后期需转入液氮罐中,需在-80℃冰箱中存放不少于24小时。
同时,对于细胞的复苏,具体步骤为:
1. 从液氮中取出冻存管,注意佩戴防护面具,快速放置于37℃水浴中解冻,直至冻存管内无结晶,随后用75%的酒精擦拭外壁;
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000RPM离心5分钟;
3. 弃去上清,沉淀后用5ml完全培养基重悬,将细胞接种至T25培养瓶中,放入37℃、5% CO2的细胞培养箱继续培养;
4. 次日,换入新鲜的完全培养基继续培养。
注意事项:部分细胞可能在运输过程中因未牢固附着而脱落,这是正常现象。如脱落数量较多,可将培养瓶内的培养液收集至离心管中,1000RPM离心5分钟,利用上清作过渡培养。在此过程中也可加入胰酶处理,并在消化后按照之前的步骤继续传代。
关于运输与使用中可能出现的问题,尊龙凯时承诺及时提供支持与重发服务,以确保您获得高质量的细胞产品。